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克隆操作 克隆分以下几部分： 感受态细胞制备； 连接转化； 克隆结果验证 一、 感受态细胞制备 1. 实验原理： 受体细胞经过一些特殊方法（ 如电击法， CaCl2等化学方法） 的处理后， 细胞膜的通透性发生了暂时的改变， 能允许外源 DNA 分子进入。 在冰冻的 CaCl2溶液中， 细菌细胞膨胀成球形， 而外源 DNA 形成羧基-钙磷酸复合物（ 具抗内切酶的能力） 粘附与细胞表面， 经 42℃短时间热击处理， 细胞可吸收外源 DNA。 2. 实验材料： 1) 材料： 大肠杆菌 JM109， 灭菌离心管， 灭菌滤纸条 2) 仪器： 恒温摇床， 冷冻离心机， 无菌工作台， 低温冰箱， 制冰机， 移液枪，灭菌锅； 3) LB 固体培养基： 胰...
克隆操作 克隆分以下几部分： 感受态细胞制备； 连接转化； 克隆结果验证 一、 感受态细胞制备 1. 实验原理： 受体细胞经过一些特殊方法（ 如电击法， CaCl2等化学方法） 的处理后， 细胞膜的通透性发生了暂时的改变， 能允许外源 DNA 分子进入。 在冰冻的 CaCl2溶液中， 细菌细胞膨胀成球形， 而外源 DNA 形成羧基-钙磷酸复合物（ 具抗内切酶的能力） 粘附与细胞表面， 经 42℃短时间热击处理， 细胞可吸收外源 DNA。 2. 实验材料： 1) 材料： 大肠杆菌 JM109， 灭菌离心管， 灭菌滤纸条 2) 仪器： 恒温摇床， 冷冻离心机， 无菌工作台， 低温冰箱， 制冰机， 移液枪，灭菌锅； 3) LB 固体培养基： 胰蛋白胨 1g， 酵母浸提物 0.5g， NaCl 1g， 蒸馏水 100 毫升，琼脂粉 1.5g。 高压灭菌。 LB 液体培养基： 胰蛋白胨 1g， 酵母浸提物 0.5g， NaCl 1g， 蒸馏水 100 毫升，用 NaOH 调 pH 至 7.0-7.2 0.1mol/L CaCl2溶液： 称取 1.11g CaCl2（ 无结晶水， 分析纯， 分子量 110.99），溶于 100mL 重蒸水中， 高压灭菌。 50%甘油： 相对密度为 1.26 的甘油， 加双蒸水稀释 1 倍， 高压灭菌。 3. 实验步骤
