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1.体细胞克隆猫的方法,所述方法包括如下步骤:(1)体细胞的分离培养;(2)制备去核卵母细胞;(3)将体细胞导入去核卵母细胞的细胞质中;(4)激活克隆胚胎;(5)将步骤(4)获得的克隆胚胎移植到受体母猫;其特征在于,去核卵母细胞获自受体母猫异体或自体只单侧冲卵的受体母猫冲卵那侧的输卵管;以及在上述步骤(5)中,将克隆胚胎移植到受体母猫未冲卵那侧的输卵管中。
2.体细胞克隆猫的方法,所述方法包括如下步骤:(1)体细胞的分离培养;(2)制备去核卵母细胞;(3)将体细胞导入去核卵母细胞的细胞质中;(4)激活克隆胚胎;(5)将步骤(4)获得的克隆胚胎移植到受体母猫;其特征在于,去核卵母细胞获自绝育猫的卵巢,经体外成熟获得成熟的卵母细胞,然后进行去核处理;以及在上述步骤(5)中,将克隆胚胎移植到受体母猫未冲卵那侧的输卵管中。
3.体细胞克隆猫的方法,所述方法包括如下步骤:(1)体细胞的分离培养;(2)制备去核卵母细胞;(3)将体细胞导入去核卵母细胞的细胞质中;(4)激活克隆胚胎;(5)将步骤(4)获得的克隆胚胎移植到受体母猫;其特征在于:一部分去核卵母细胞获自只单侧冲卵的受体母猫冲卵的输卵管,另一部分去核卵母细胞获自进行了冲卵的供体母猫的输卵管;以及在上述步骤(5)中,将克隆胚胎移植到受体母猫未冲卵那侧的输卵管中。
4.根据权利要求1-3任一项的方法,其中,在所述步骤(1)中体细胞来自皮肤、肌肉、耳、乳腺、输卵管或卵巢。
5.根据权利要求4的方法,所述体细胞为皮肤细胞、上皮细胞、耳细胞、成纤维细胞、内皮细胞、肌肉细胞、乳腺细胞、输卵管细胞、卵巢细胞、卵丘细胞、神经细胞或成骨细胞。
6.根据权利要求1或2的方法,其中,在步骤(2)中,用pmsg和hcg处理受体母猫后确定受体母猫的发情和排卵,然后进行单侧或双侧冲卵获得成熟的卵母细胞,再进行成熟卵母细胞的去核处理,优选地,通过形态学观察,确认所有进行注核的卵母细胞均已去核。
8.根据根据权利要求1-3任一项的方法,其中,在步骤(3)中,所述融合方法是用仙台病毒进行融合,优选地,在细胞中加入1×的仙台病毒稀释液重悬细胞,离心,弃上清,用3倍稀释仙台病毒重悬细胞,冰浴,将细胞悬液放入操作液中,挑选细胞进行注核。
9.根据根据权利要求1-3任一项的方法,其中,在步骤(3)中,所述融合方法为电融合,所述电融合的电压为1.0-3kv/cm,优选地,电压为1.0-1.6kv/cm。
10.根据根据权利要求1-3任一项的方法,其中,在步骤(3)中,所述融合方法是仙台病毒融合结合电融合,所述电融合的电压为1.0-3kv/cm,优选地,电压为1.0-1.6kv/cm。Kaiyun网站Kaiyun网站