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　　当单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体，成为集落或克隆。每个克隆含有50以上的细胞,大小在０。3—1。０ｍm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力.各种理化因素可能导致细胞的克隆形成能力发生改变。通过一定的实验方法可以对细胞的克隆形成能力进行检测。

　　细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大：

　　一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形成率弱，转化细胞系强;正常细胞克隆形成率弱，肿瘤细胞强。

　　(b） 软琼脂集落形成实验:本法适用于非锚着依赖性生长的细胞，如骨髓造血干细胞、肿瘤细胞株、转化细胞系.

　　1、取对数生长期的各组细胞,分别用0。２5%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，并把细胞悬浮在10％胎牛血清的DMEM培养液中备用。

　　2、将细胞悬液作梯度倍数稀释，每组细胞分别以每皿50、1０0、2０0个细胞的梯度密度分别接种含10mL37℃预温培养液的皿中,并轻轻转动，使细胞分散均Kaiyun中国 官方网站匀。置37℃５％CO２及饱和湿度的细胞培养箱中培养2～3周.

　　3、经常观察,当培养皿中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去上清液,用PＢS小心浸洗２次.加4％多聚甲醛固定细胞5mL固定１5分钟.然后去固定液，加适量GIMＳA应用染色液染10～３0分钟,然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。

　　４、将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片,用肉眼直接计数克隆,或在显微镜(低倍镜)计数大于１0个细胞的克隆数.最后计算克隆形成率。

　　平板克隆形成试验方法简单，适用于贴壁生长的细胞。适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿.试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好,不能有细胞团，接种密度不能过大.

　　平板克隆形成试验方法简单，适用于贴壁生长的细胞.适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好，不能有细胞团，接种密度不能过大。

　　(1）取对数生长期细胞，用0．２5％胰蛋白酶消化并轻轻吹打,使之成为单细胞,作活细胞计数，用含20％胎牛血清的DMＥM培养液调整细胞密度至1×106细胞/L。然后根据实验要求作梯度倍数稀释。

　　（2）用蒸馏水分别制备出1。２%和0．7％两个浓度的低溶点琼脂糖液,高压灭菌后，维持在40℃中不会凝固。

　　(3)按1：１比例使1．２％的琼脂糖和2×DＭEＭ培养基（含有２×抗生素和2０%的小牛血清）混合后,取3ｍL混合液注入直径6ｃm平皿中(１０ｃm平皿加7~1０mL），冷却凝固,可作底层琼脂置CO２温箱中备用。

　　(4）按1：１比例让0.７％的琼脂糖和2×ＤＭEM培养基在无菌试管中相混以后,再向管中加入０.２mL的细胞悬液，充分混匀,注入铺有1。2％琼脂糖底层平皿中，逐形成双琼脂层。待上层琼脂凝固后，置入３7℃5%CO2温箱中培养10~14天。

　　(５）把平皿放置在倒置显微镜下,观察细胞克隆数.计算形成率.软琼脂培养法常用检测肿瘤细胞和转化细胞系。试验中琼脂与细胞相混时，琼脂温度不宜超过40℃.接种细胞的密度每平方厘米不超过35个，一般6cｍ的平皿接种1000个细胞。正常细胞在悬浮状态下不能增殖，不适用于软琼脂克隆形成试验. ...感谢聆听...

　　将1。2%低熔点琼脂糖与2×细胞培养基以1：1的体积比混合制备0.6％的底层琼脂，6孔板中每个孔1．４ml温室凝固,取对数期细胞,胰酶消化后吹散成单个细胞悬液,计数,并调细胞浓度为10000个/ml，将0．６％低熔点琼脂糖与２×细胞培养基以１：1的体积比混合，制备0。3%的上层琼脂,每孔加1ml上层琼脂和１0０ul单细胞悬液（约100０cｅｌｌ/wｅll），混匀,室温凝固。置于3７℃，５％CO2的细胞培养箱中培养２—３周,计数含50个细胞以上得克隆，计算细胞集落形成率，SｐotII采集图像。...感谢聆听...

　　3．琼脂对热和酸不稳定,若反复加热，容易降解而产生毒性，且硬度下降.因此高压灭菌后应进行分装；

　　4．细胞在进行克隆形成实验时要求有9５%以上的分散度,否则结果的准确度会受到很大影响;

　　5．细胞在低密度、非贴壁状态条件下培养,生存率明显下降,永生细胞系/株克隆形成率可达到10％以上，但初代培养细胞和有限传代细胞系克隆形成率仅为0．5％—5％，甚至无法形成单个克隆。因此，为了提高克隆形成率,有时需要在培养基中添加胰岛素、地塞米松等促克隆形成物质....感谢聆听...

　　6.细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。做克隆形成率测定时，接种细胞一定要分散成单细胞悬液,直接接种在碟皿中，持续一周，随时检查，到细胞形成克隆时终止培养。